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        豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體檢測試劑盒(間接ELISA)

        產品編號:100703

        檢測方法:Elisa試驗

        檢測樣品:血液

        規格:96T/192T


          

        豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體檢測試劑盒(間接ELISA)




        豬偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)抗體檢測試劑盒用于檢測豬血清中的PRV抗體,評估養豬場豬偽狂犬病毒疫苗免疫狀況及感染豬的血清學輔助診斷。

        本試劑盒采用間接ELISA法,在酶標板條微孔上預包被純化的豬偽狂犬病毒gB抗原。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,經過溫育后,若樣品中含有PRV特異性抗體,則與包被板上的抗原結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后;再加入酶標二抗,與檢測板上的抗原抗體復合物發生特異性結合;再經洗滌除去未結合的酶結合物;在微孔中加入TMB底物液,經酶催化形成藍色產物,加入終止液終止反應后,用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

         

        組份

        1

        抗原預包被板條

        1/2

        7

        陰性對照

        0.8/1.6ml

        2

        酶結合物

        6/11ml

        8

        陽性對照

        0.8/1.6ml

        3

        10倍濃縮洗滌液

        50/100ml

        9

        血清稀釋板

        1/2

        4

        顯色液

        11/22ml

        10

        封板膜

        2/4

        5

        樣本稀釋液

        50/100ml

        11

        說明書

        1

        6

        終止液

        6/11ml




         

        需自備的設備及試劑

        1. 微量移液器: 0.5μl-10μl、10μl-100μl、100μl-1000μl。

        2. 一次性移液器吸頭。

        3. 量筒:500ml。

        4. 96孔板酶標儀。

        5. 蒸餾水或去離子水。

        6. 洗瓶或洗板機。

         

        樣品制備

        取動物全血,按常規方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。

        洗滌液的準備

        濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫,如有鹽結晶,搖動使結晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

        樣品的稀釋

        在血清稀釋板中按1100的體積比稀釋待檢血清。

        注意:陰性和陽性對照不用稀釋。取每個樣品后都要更換吸頭,準確記錄每個樣品在板上的位置。每個樣品在加入到包被板微孔前應充分混勻。

         

        注意事項

        1. 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫,應將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應搖勻,使用后放回2-8℃。

        2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應防止試劑污染。

        3. 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應該注意防護。

        4. TMB(顯色液)不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

        5. 檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2-8℃)。

        6. 所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。

        7. 嚴格遵守操作說明可以獲得最好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

        8. 血清稀釋板為一次性用品,不得重復使用;血清稀釋板的最大容量為300μl/孔。

         

        操作步驟

        1. 取預包被的檢測板(根據樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時設陰性對照1孔,陽性對照2孔,取陰性及陽性對照各100μl分別加入反應孔中輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)。

        2. 蓋上封板膜(可按實際需要自行裁剪),置37℃溫育30分鐘。

        3. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃度洗滌液每孔加250ul,后甩去孔內液體,以上步驟重復4-6次,最后在干凈吸水紙上拍干。

        4. 每孔加酶結合物50μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。

        5. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌4-6方法同3。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

        6. 每孔加顯色液100μl,輕微震蕩混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。

        7. 每孔加終止液50μl,使反應終止,10分鐘內測定結果。

         

        結果判定

        用酶標儀于450nm630nm作參比波長)讀取吸光度OD值。

        試驗成立的條件是:

        陰性對照(NOD<0.2,同時陽性對照(POD值〉0.4。

        計算方法:

        樣品OD÷陽性對照OD均值=S/P

        陰陽性判斷:

        S/P≥0.5判斷為陽性;

        S/P<0.5判斷為陰性。

         

        貯存方法 2 - 8oC下貯存。

        有效期 12個月。

         


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